| DNS izdalīšana no vaigu epitēlija. |
[23 Sep 2004|10:04pm] |
Intensīvi skalo mutes dobumu ar hexoral vai arī ar ūdeni, ja ir alerģija. Vēlams skalot pirms zobu tīrīšanas.
Centrifugē 20 minūtes ar ātrumu 6000 apgriezieni minūtē.
Supernatantu - šķidro fāzi - nolej. Nogulznēm pievieno 3 ml līzes bufera un uzglabā 0 minūtes ledū. Ja šūnu atliekas veido kamolus, nogulsnes homogenizē ar stikla homogēnu. Līzes buferis ir - TRIS, HCl, saharoze, MgCl2, TRITON X100, ūdens. Pagatavošana - 1,21 gramu TRIS ievieto kolbā, pievieno apmēram 10 ml 0,4 M HCl, uzpilda līdz 800 ml, panāk, ka pH=7,5. Pēc tam pievieno 109,536 gramus 0,32 M saharozes, 0,476 gramus 5 mM MgCl2 un 10 gramu TRITON X100 (1%). iegūto šķidrumu papildina līdz 1000 ml ar destilētu ūdeni. uzglabā atdzesētu.
Centrifugē 10 minūtes ar ātrumu 6000 apgriezieni minūtē.
Nolej šķidro fāzi un nogulsnēm pievieno -
*1,5 ml resuspensijas bufera (NaCl, EDTA, NaOH, ūdens. Kolbā ieber 4,388 g NaCl, 7,014 g EDTA, pievieno destilētu H2O līdz tilpumam 900 ml. izšķīdina. Panāk šķīduma pH=8,0, uzmanīgi pievienojot NaOH. Uzglabā atdzesētu), nogulsnes suspendē. Ja šūnu atliekas veido kamolus, nogulsnes homogenizē ar stikla homogēnu.
*40 mikrolitru protenāzi K (Protenase K)3, sakrata
*15 mikrolitrus ribonuklerāzes, sakrata;
*150 mikrolitru 10% SDS (nātrija dodecilsulfāta), sakrata.
Inkubē 2 stundas un 56 grādu temperatūrā pēc Celsija.
pēc inkubācijas šķīdumam pievieno 0,6 ml piesātināta Na Cl šķīduma, sakrata. Ja uzreizi neveidojās balti kristāli, papildus pievieno NaCl šķīdumu. Atstāj šķīdumu -4 grādu pēc Celsija ( uz ledus) vismaz 30 minūtes.
Centrifugē 10 minūtes (6000 apgr/min).
Supernatantu ar pipeti pārnes tīrā mēģenē. Pievieno 2 reizes lielāku tilpumu 96% atdzesēta etilspirta, sajauc.
Šķīdumu ievieto saldētavā vismaz uz vienu stundu, ieteicams līdz nākamajai dienai.
Centrifugē 10 minūtes (6000 apgr/min)
Supernatantu nolej. Uz nogulsnēm uzlej 1 ml 70% etilspirta. centrifugē kā iepriekš. Atkal nolej supernatantu, nogulsnes žāvē. JA NOGULSNĒS VĒROJAMS PELĒKI BALTS KRĀSOJUMS< ATKĀRTO DARBĪBAS SĀKOT NO 3 PUNKTA.
Pievieno 50 mikrolitrus ūdens un sajauc ar mikropipeti un izšķīdina nogulsnes
Pēc vienas stundas pārnes ependorfā, kur smuki vērojams mūsu DNS pavedieni
|
|
| pirms pazūd nebūtībā - teksts, ko drukāju mazliet mazāk kā pirms gada - ja nemaldos 18,19 decembris |
[23 Sep 2004|10:35pm] |
-----
Kaukāc sviests :) Viss ir oki :))) jautri. Meitene baltā blūzītē, kino pajuka, nu tas jau bija paredzams, bet tas ok. Vismaz ir 2x incantāk nekā būtu sēdējuši un skatījuši filmu (kuru es jau esmu redzējis :PP ) Bet nu jautri ir enivei. Un tas jau tas pats galvenais. Ek. Akal vinja pazuda. vien draudzene [Meitenei] tikko jautāja - kur galvenā ieeja :D Pavisam ir trīs ieejas un ej nu sazin, kurējā ir galvenā. Hmm, taga Meitene nerādās pietiekami ilgu laiku. Pirmoreiz šī uzradās varen negaidīti, tikko izdzērām tēju + apelsīnu, vai varbūt kādu citu - persiku varbūt :) Nu nez, bet viss notiek samērā strauji un ātri. bezmaz vai - ko es te daru...?? bet ir jautri:) un tas ir tas galvenais. Šodien eksāmena laikaa saaku drukaat shaadaa stilaa :))) laikam vajadzeetu likvideeties attieciibaa uz chatu :))) Sēžu alfā un bik dom;aju par šito stuffu, kas te notiek. Man mazliet izskatās pēc ņirgāšanās. SMF gadatirgus, heh, jaunie uzņēmēji.. nu varbūt vienīgi pozitīvi tas, ka cilvēki taga apzinās šo tirgus birokrātiju, kas notiek riņķī apkārt.. Papīri tur, papīri šur. Paraksti vēlnezinkautkur. Uzņēmējdarbība, heh, itsevišķi Junior Acheivment.. tos es neieredzu, nē nu ne gluži neieredzu, bet gan viņi liekās tik piezemēti, parodija par dzīvi... :)
----
Tā es rakstīju toreiz.
biju laimīgs tobriid :]
un TAS bija pats galvenais
|
|